一、質量標準
1.總體原則
一般情況下,應保證實驗動物能按其具體要求而獲得適宜而無污染的飲水,實驗動物飲用水的品質應符合人飲用水的標準。為保證水質的質量,必須定期監測其pH、硬度、微生物狀況及化學物質污染情況,特別是實驗動物飲用水的水質可能影響實驗結果的研究項目。對于要求高純水的研究項目,可對水進行處理或提純,以盡量減少或消除其污染物。水的處理方法應當合理選擇,因為有些飲用水的處理方法可能影響動物生理過程的改變、微生物區系的變化,或影響實驗結果。例如,經氯化處理的自來水對有些種類的動物適用,但對另一些動物則有毒性,如水生動物。
供水裝置,如飲水管和自動飲水器,應定期檢查以保證正常運行。有時要訓練動物使用自動飲水裝置。采用飲用水瓶的,盡量是更換而不是加灌,以防潛在的微生物交叉污染;如果是重新灌裝,則應注意每只水瓶要放回原籠位置。
二、器皿的清洗消毒
(1)清理盛水器皿中的飼料、飲水等剩余物,采用中性洗滌劑水溶液洗凈附著的污物。
(2)清洗水槽中加入次氯酸鈉,濃度調至100~200ppm。
(3)將飲水瓶完全浸泡于水槽中,浸泡12~24h。
(4)用清水洗凈飲水瓶上附著的消毒液,水槽中消毒液重新更換。
(5)干燥后放在規定的清潔場所,并進行必要的裹蓋,以防二次污染,待用。
三、滅菌方法
(一)普通級實驗動物飲用水滅菌處理
不強制要求滅菌處理,但應防止二次污染的可能。移動式盛水器皿應每次使用前進行清洗、消毒、漂凈,固定式供水管、飲水嘴應定期拆卸進行徹底清洗、消毒、漂凈,方法同“盛水器皿(飲水盆、飲水瓶、瓶塞等)的清洗消毒”。
(二)清潔級及以上實驗動物飲用水應經過滅菌處理
一般采用高壓蒸汽滅菌和過濾除菌兩種處理方法。
1.高壓蒸汽滅菌操作程序
(1)高壓滅菌的條件,根據滅菌器的機種、性能、容量大小,以及被滅菌飲水的量、容量、形狀、污染程度等不同而不同,應采用“液體”滅菌模式。
(2)將耐高壓蒸汽滅菌的清潔水瓶洗凈后,裝入飲水瓶容量80%的自來水(符合GB5479-2006標準),蓋上經清洗消毒過的飲水瓶塞,放入耐熱性飲水瓶容器中。
(3)在飲水瓶的適當部位,貼上高壓滅菌用顏色指示劑,并用鉛筆注上日期、時間等。
(4)將裝有水瓶的容器放入高壓滅菌器,因為滅菌物是飲水(液體),因此除此之外的東西(如墊料、飼料等)不能同時放入滅菌器一起滅菌。
(5)飲水的滅菌條件一般為121℃、40~50min。
(6)滅菌結束后,應慢慢排放蒸汽,滅菌30min以上的飲水,冷卻時間要稍長一些,滅菌器門打開后,需靜止片刻再取出,以防止沸水噴出。
(7)滅菌后的飲水放在固定的潔凈場所保存,滅菌后及使用前應檢查顏色指示劑的滅菌程度。
(8)用規定記錄紙記錄高壓滅菌器處理的日期、時間、條件、操作者、被滅菌物的種類和數量等。
2.過濾除菌操作程序
(1)砂濾系統:采用石英砂介質過濾器,主要目的是去除原水中含有的泥沙、鐵銹、膠體物質、懸浮物等顆粒在20μm以上對人體有害的物質,自動過濾系統可以自動(手動)進行反沖洗、正沖洗等一系列操作。
(2)活性炭吸附系統:采用活性炭過濾器,目的是為了去除水中的色素、異味、生化有機物、降低水的余氨值及農藥污染和其他對人體有害的物質。自動過濾控制系統可以自動(手動)進行反沖洗、正沖洗等一系列操作。
(3)樹脂交換系統:采用質量較優的樹脂對水進行軟化,主要是降低水的硬度,去除水中的鈣鎂離子(水垢)并可進行智能化樹脂再生。
(4)超濾系統:采用5μm孔徑精密過濾器使水得到進一步的凈化,使水的濁度和色度達到優化,保證RO系統安全的進水要求。
(5)反滲透系統:采用反滲透技術進行脫鹽處理,去除鈣、鎂、鉛、汞等對人體有害的重金屬物質及其他雜質,降低水的硬度,脫鹽率98%以上,生產出達到國家標準的純凈水。
(6)殺菌系統:采用紫外線殺菌器進行再次殺菌。
四、普通級實驗動物飲用水質量檢測
實驗動物飲用水質量是指實驗動物設施供水管網末梢水質狀況。檢測頻率一般為每半年一次,特殊情況應增加檢測頻率。
(1)實驗動物飲用水的標準檢驗方法采用《GB/T 5750.1-2023生活飲用水標準檢驗方法總則》。
(2)實驗動物飲用水水樣采集與保存采用《GB/T 5750.2-2023生活飲用水標準檢驗方法水樣的采集和保存》。
(3)實驗動物飲用水水質分析質量控制采用《GB/T 5750.3-2023生活飲用水標準檢驗方法水質分析質量控制》。
(4)實驗動物飲用水感官性狀和物理指標檢測采用《GB/T 5750.4-2023生活飲用水標準檢驗方法感官性狀和物理指標》。
(5)實驗動物飲用水無機非金屬指標檢測采用《GB/T 5750.5-2023生活飲用水標準檢驗方法無機非金屬指標》。
(6)實驗動物飲用水金屬指標檢測采用《GB/T 5750.6-2023生活飲用水標準檢驗方法金屬指標》。
(7)實驗動物飲用水有機物指標檢測采用《GB/T 5750.7-2023生活飲用水標準檢驗方法有機物綜合指標》及《GB/T5750.8-2023生活飲用水標準檢驗方法有機物指標》。
(8)實驗動物飲用水農藥指標檢測采用((GB/T 5750.9-2023生活飲用水標準檢驗方法農藥指標》。
(9)實驗動物飲用水消毒副產物指標檢測采用((GB/T 5750.10-2023生活飲用水標準檢驗方法消毒副產物指標》。
(10)實驗動物飲用水消毒劑指標檢測采用(GB/T 5750.11-2023生活飲用水標準檢驗方法消毒劑指標》。
(11)實驗動物飲用水微生物指標檢測采用《GB/T 5750.12-2023生活飲用水標準檢驗方法微生物指標》。
(12)實驗動物飲用水放射性指標檢測采用《GB/T 5750.13-2023生活飲用水標準檢驗方法放射性指標》。
五、清潔級及以上實驗動物飲用水質量檢測
屏障與隔離環境實驗動物飲用水的微生物檢測采用“無菌檢查法”(《中國藥典》,2020年版,三部附錄)的方法,其他指標檢測同“普通環境實驗動物飲用水質量檢測”。微生物指標檢測一般每3個月一次,其他水質指標每半年一次。
六、滅菌效果評價
(一)普通環境實驗動物飲用水評價
普通環境實驗動物飲用水不強求進行滅菌處理,但供水機構應進行消毒處理,微生物指標應參考GB 5749-2022標準,不得含有病原微生物。
(二)屏障和隔離環境實驗動物飲用水高壓蒸汽滅菌效果評價
高壓蒸汽滅菌效果的監測主要選用以下3種方法。
1.實時檢測
實時檢測,又稱程序監測。根據安裝在滅菌器上的量器(壓力表、溫度表、計時表)、圖表、指示針、報警器等,指示滅菌設備工作正常與否。此法能迅速指出滅菌器的故障,但不能確定待滅菌物品是否達到滅菌要求。此法作為常規監測方法,每次滅菌均應進行并作相應記錄。
2.化學指示監測
利用化學指示劑在一定溫度與作用時間條件下受熱變色或變形的特點,以判斷是否達到滅菌所需參數。常用的有以下幾種。
(1)自制測溫管:將某些化學藥物的晶體密封于小玻璃管內(長2cm,內徑1~2mm)制成。常用試劑有苯甲酸(熔點121~123℃)等。滅菌時,當濕度上升至藥物的熔點時,管內的晶體即熔化,滅菌完畢后雖冷卻再凝固,其外形仍可與未熔化的晶體相區別,此法只能指示溫度,不能指示熱持續時間是否已達標,因此是比較低標準。主要用于實驗動物飲用水滅菌溫度的監測。
(2)3M壓力滅菌指示膠帶:此膠帶上印有斜形白色指示線條圖案,是一種貼在待滅菌的無菌包外的特制變色膠紙。其粘貼面可牢固地固定于飲水瓶表面,在121℃、20min后,膠帶100%變色(條紋圖案即顯現黑色斜條)。3M膠帶既可用于實驗動物飲用水滅菌溫度的監測,又可在其表面填寫滅菌日期、時間、保質期等內容。
3.生物指示劑監測
利用耐熱的非致病性細菌芽胞作指示菌,以測定熱力滅菌的效果。菌種用嗜熱脂肪桿菌,本菌芽胞對熱抗力較強,其熱死亡時間與病原微生物中抗力較強的肉毒桿菌芽胞相似。生物指示劑有芽胞懸液、芽胞菌片及菌片與培養基混裝的指示管。檢測時應使用標準試驗包,每個試驗包中心部位放置生物指示劑2個,放在滅菌柜室的5個點,即上、中層的中間各一個點,下層的前、中、后各一個點。滅菌后,取出生物指示劑,接種于溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養基中,置55~60℃溫箱中培養48h至7天,觀察結果。若培養后顏色未變,澄清透明,說明芽胞已被殺滅,達到了滅菌要求。若變為黃色渾濁,說明芽胞未被殺滅,滅菌失敗。
(三)屏障和隔離環境實驗動物飲用水過濾除菌效果評價
實驗動物飲用水過濾除菌效果評價同樣采用“無菌檢查法”(《中國藥典》,2020年版,三部附錄),經細菌培養不得有任何細菌生長方為合格。
本文摘自《實驗動物管理與使用指南》!
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